Исследование влияния Цитросепта® - концентрата биофлавоноидов - на жизнеспособность клеток новообразований in vitro

1. ВСТУПЛЕНИЕ 

Концентрат биофлавоноидов грейпфрута, производимый фирмой Cintamani под названием ЦИТРОСЕПТ, содержит большое количество существенных для здоровья компонентов. Прежде всего, в нем много флавоноидов (флавоны, флаваноны, флаваноли), содержит он также витамин С. Флавоноидные соединения обладают противоокислительными свойствами и являются т.н. ликвидаторами свободных радикалов. Главный источник флавоноидов в повседневном рационе - это фрукты и овощи. Помимо антиокислительного флавоноиды оказывают также антибактериальное, антивирусное, антигрибковое и цитотоксичное воздействие.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

 Для определения цитотоксичной активности цитросепта использовались опухолевые клетки мышиного образования меланома В16. Клетки выращивались в пластиковых сосудах типа corning в питательной среде MEM (Minimum Eagle's Medium) с добавлением 10% животной сыворотки и смеси антибиотиков. Перед опытом клетки были отделены от стенок сосуда при помощи раствора трипсина и подверглись вращательному воздействию (1000 об/мин, 10 минут). Полученная клеточная взвесь в жидкости МЕМ была перенесена на пластинку с 24 ячейками (с плотностью 1,5х104 на ячейку). Через 24 часа инкубации (5% СО2, 37°С) жидкость была заменена и добавлено исследуемое соединение в диапазоне концентраций от 5 до 120 мкг/мл. Соединение было предварительно разведено в DMSO и доведено до соответствующих концентраций методом постепенного разбавления. В качестве контрольной была взята клеточная взвесь в МЕМ без добавления соединения. Проводился также контроль воздействия самого DMSO. Через 24 часа инкубации (5% СО2, 37°С) жидкость, содержащая исследуемое соединение, была удалена и добавлена трипановая лазурь, избранно подкрашивающая мертвые клетки. Через 8 минут краситель был удален, ячейки с клетками дважды промыты буферным раствором физиологической соли PBS с добавлением животной сыворотки (10:1) и наблюдались под микроскопом. Подсчитывались как мертвые клетки (подкрашенные голубым), так и живые (неподкрашенные) на 100 в поле зрения. Опыт повторялся трижды для каждой концентрации, за итоговый результат принималось среднее значение.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ

Полученные результаты исследований влияния Цитросепта на жизнеспособность клеток новообразований линии меланома В16 представлены в таблице 1. Они показывают, что Цитросепт обладает высокой противоопухолевой активностью в исследованиях in vitro. IC50 (концентрация, при которой наблюдается 50%-ная смертность клеток) составляет 40 мкг/мл. Сведения из специальной литературы представляют сферу цитотоксичного воздействия флавоноидов между 10 и 250 мкг/мл. Подобные исследования, проводимые с использованием вытяжек грейпфрута, показывали их цитотоксичную активность в том же диапазоне концентраций.

Таким образом, цитостатическую активность Цитросепта можно определить как высокую, что предполагает дальнейшие исследования этого препарата in vitro и in vivo.

Таблица 1. Значения концентраций Цитросепта, исследуемых с точки зрения цитотоксичной активности.