Анна Кендзя
Доктор диссертант мед. наук
Отделение микробиологии ротовой полости
Гданьской медицинской академии

Дрожжеподобные грибки, одноклеточные организмы, широко распространены в природе (почва, вода, растения). Среди свыше 140 разновидностей рода кандида только некоторые считаются патогенными для человека и животных. Дрожжеподобные грибки существуют у здоровых людей в качестве физиологической флоры. Они есть в ротовой полости и пищеварительном тракте (30-50%) и у женщин в детородных путях (около 20%). Однако при благоприятных условиях они могут вызывать заболевания. У большинства людей (пациентов) заражение дрожжевиками является эндогенным и имеет источник в ротовой полости или в пищеварительном тракте. Примером могут быть инфекции, вызванные грибками рода кандида, которые проникли из ротовой полости до носовых пазух, слюнных желез, миндалин, горла или легких. Реже эти грибки приходят из внешней среды и приобретаются через дыхательные пути, пищеварительный тракт или проникновением через повреждения на коже (экзогенное заражение). Неповрежденная кожа и слизистые оболочки, а также исправно действующие иммунные механизмы в организме в достаточной степени защищают от грибковой инфекции.

К факторам, располагающим к заражению грибками, относятся:

• снижение сопротивляемости организма,
• недостаточное питание, авитаминоз,
• заболевания желез внутренней секреции,
• опухоли,
• диабет,
• возраст (младенцы, лица старше 70 лет),
• беременность,
• лечение цитостатиками, кортикостероидами и оральные контрацептивы.

К грибковой инфекции приводит также антибиотикотерапия, особенно тогда, когда применяются антибиотики с широким спектром воздействия, которые снижают количество полезных микроорганизмов физиологической флоры и делают возможным чрезмерный рост грибков. Также известно, что определенные антибиотики могут подавлять защитные механизмы в организме и, таким образом, облегчать развитие кандидоза.

Заражения дрожжеподобными грибками протекают в 3 этапа. На первом этапе наступает прилегание клеток кандиды к клеткам эпителия. Это происходит благодаря реакции между сцепляющими элементами, размещенными на поверхности грибка, и рецепторами, находящимися на поверхности клеток эпителия. К этим сцепляющим элементам, которые участвуют в прилегании дрожжевиков рода кандида, относятся: маннопротеины, глюкан, хитин, протеины клеточной стенки и липиды (10). На следующем этапе начинается колонизация, и в это время грибки создают ряд энзимов, разъедающих эпителий. На третьем этапе дело доходит до вторжения грибков в клетки эпителия. Это связано с выработкой дрожжеподобными грибками различных энзимов, в том числе протеиназа (разлагает белок и облегчает прилегание) и гидролитических энзимов, которые облегчают проникновение грибков в ткани (10). Кроме того, токсины и энзимы, вырабатываемые кандидой, кладут начало воспалительному процессу, который ведет к повреждению эпителия и, следовательно, к проникновению дрожжеподобных грибков вглубь тканей. Это может привести к поражению органов или систем кандидозом.

Кандидоз чаще всего вызывается кандидой альбиканс (80%), и реже другими видами, в т.ч. Candida tropicalis, Candida glabrata, Candida krusei, Candida parapsilosis. Проводимые исследования указывают на постоянный рост числа заражений, вызванных грибками рода кандида. Неправильное применение противогрибковых лекарств ведет к неэффективности терапии и делает возможным селекцию штаммов грибков, невосприимчивых к антимикотикам. По этой причине постоянно ищутся новые средства, в том числе естественного (растительного) происхождения, которые нашли бы применение в противогрибковой профилактике и терапии, с высокой эффективностью действия и низкой токсичностью.

Постоянно растет интерес врачей и пациентов к фитотерапии. Многолетние эксперименты показывают, что растительные лекарства особенно подходят для лечения заболеваний в области дыхательных путей.

В 1980 г. было обращено внимание на различные свойства экстракта флавонойдов грейпфрута (Цитросепта). Во многих странах (США, Канада, Франция, Германия, Дания, Корея, Бразилия) проведены исследования, касающиеся использования этой вытяжки в различных сферах, в частности, в земледелии, лесном хозяйстве, пищевой промышленности, косметической промышленности, ветеринарии и многих других. Опыты показали, что флавонойды грейпфрута оказывают антимикробное воздействие, что создает возможность его применения как в профилактике, так и при лечении различных заболеваний.

Производимый фирмой Cintamani International (Норвегия) экстракт  под названием Цитросепт содержит флавоноиды (19,37%) : (флавоны, флавоноли, флаваноны), витамин С (4,9 г в 100 мл препарата) и водный раствор глицероля, получаемый из пальмового масла. Вследствие высокого содержания флавоноидов препарат характеризуется очень горьким вкусом. Он обладает приятным запахом цитрусовых плодов.

Исследования также показали, что экстракт обладает полезными антиокислительными свойствами благодаря способности связывать свободные радикалы перекиси.

Противомикробное воздействие вытяжки из грейпфрута вероятно основано на повреждении клеточной стенки и цитоплазменной оболочки, а также сдерживании синтеза аминокислот.

Результаты проведенных ранее исследований указывают на высокую активность этого экстракта по отношению к различным аэробным и анаэробным бактериям. Немного, однако, существует письменных данных о воздействии Цитросепта на дрожжеподобные грибки.

Целью работы было определение чувствительности к Цитросепту (Cintamani) дрожжеподобных грибков рода кандида, выделенных из острых и хронических заражений дыхательных путей. 

Материал и методы исследований

Дрожжеподобные грибки, используемые в исследованиях, были выделены из материалов, полученных от 78 пациентов с острым или хроническим заражением верхних или нижних дыхательных путей. Мазки, мокроты, гной или гнойная жидкость высеивались на поверхности агара Сабуро и в бульоне Сабуро с инкубацией при температуре 37°С в течение 48 часов. Препараты изготовлялись непосредственно, и готовились препараты из выращиваемых колоний, которые окрашивались методом Грама. Идентификация образцов кандиды осуществлялась на основе морфологии, теста филаментации, создания хламидоспор на рисовом субстрате и наблюдаемого роста на субстрате CHROMagar Candida. Исследовались биохимические характеристики с оценкой способности образца к ферментации (зимограмма, Fongiscreen 4 H, Sanofi Diagnostics Pasteur) и ассимиляции сахаров (ауксанограмма, Auxacolor, Sanofi Diagnostics Pasteur). Образцы классифицировались до вида или рода системой нумерации.

Определена чувствительность к Цитросепту (Cintamani) 98 образцов дрожжеподобных грибков следующих видов: Candida albicans (49 образцов), Candida glabrata (10), Candida kefyr (2), Candida krusei (8),Candida parapsilosis (9) и Candida tropicalis (20), а также 1 эталонного образца Candida albicans PCM 1409 PZH. Чувствительность грибков к экстракту грейпфрута исследовалась методом серийных разбавлений в агаре. Непосредственно перед экспериментом препарат растворялся в стерильной дистиллированной воде, и соответствующие концентрации добавлялись в агар Сабуро. В исследованиях использовались следующие концентрации: 12,5 mг, 25 mг, 50 mг, 100 mг и 200 mг на 1 мл субстрата. Привой, содержащий 106 CFU в 1 капле, переносился на поверхность агара инокулятором Стирса. Инкубация посевов и контрольных субстратов (рост образцов), не содержащих экстракта, проводилась в течение 24 часов при температуре 37°С. За MIC принималась такая наименьшая концентрация Цитросепта, которая полностью тормозила рост дрожжеобразных грибков. 

Результаты и обсуждение

 Полученные результаты исследований чувствительности к Цитросепту (Cintamani) 98 образцов дрожжеподобных грибков рода кандида представлены в таблице 1. Они указывают на то, что наиболее чувствительными к действию препарата были образцы вида Candida krusei. Среди 8 исследуемых образцов рост 3 (37%) был задержан при наинизших концентрациях в диапазоне £12,5-25 mг/мл. Следующий образец (12%) был чувствителен к концентрации, составляющей 100mг/мл, а остальные 4 (50%) образца - к 200mг/мл. Подобной чувствительностью в пределах низких концентраций характеризовались образцы вида Candida tropicalis. Рост свыше 1/3 образцов (35%) был задержан при наинизших концентрациях в диапазоне от <12,5-25 mг/мл, 1 (5%) образца при концентрации, составляющей 50 mг/мл, 2 (10%) при 100 mг/мл. Остальные образцы (50%) были чувствительны к концентрациям, составляющим >200 mг/мл.

Чаще всего участвующие в заражениях и самые многочисленные в этих исследованиях образцы вида Candida albicans были несколько менее чувствительны к Цитросепту. Самые низкие концентрации в диапазоне £12,5-25 mг/мл затормозили рост 7 (14%) образцов. Следующие 5 (10%) образцов этого вида были чувствительны к 50mг препарата в 1 мл. MIC для 6 (12%) образцов составила 100 mг/мл, а для остальных 31 (64%) ³200 mг/мл. Рост эталонного образца Candida albicans PCM 1409 PZH не был задержан в диапазоне исследуемых концентраций.

Более низкой чувствительностью к Цитросепту характеризовались образцы вида Candida glabrata. Среди 10 образцов 1 (10%) был чувствителен к 25 mг/мл, 4 (40%) образца к концентрации, составляющей 100 mг/мл, а остальные 5 (50%) к 200 mг/мл.

Наименьшую активность показал препарат по отношению к двум видам. Первый из них - это Candida parapsilosis. Свыше 1/2 образцов этого вида (55%) требовала для торможения роста концентрацию, составляющую 200 mг/мл, а остальные 45 % образцов - более высокие концентрации, ³200 mг/мл. Образцы, принадлежащие к другому виду, Candida kefyr, были чувствительны к 200 mг экстракта в 1 мл.

Суммируя результаты исследований, следует подчеркнуть, что Цитросепт (Cintamani) при очень низких концентрациях в диапазоне от £12,5-50 mг/мл задерживал рост 1/4 среди всех исследованных образцов дрожжеподобных грибков. Среди них были образцы рода Candida albicans (24%), которые чаще всего вызывают грибковую инфекцию. Внимания заслуживает также тот факт, что две разновидности рода кандида, которые часто показывают высокую сопротивляемость к противогрибковым лекарствам, были чувствительны к концентрациям экстракта, составляющим от £12,5-100 mг/мл. Это были образцы вида Candida glabrata (50%) и Candida krusei (49% чувствительных образцов),

Из проведенных исследований вытекает, что все образцы дрожжеподобных грибков рода кандида, выращенные от пациентов с острым или хроническим заражением в области дыхательных путей, показали значительную чувствительность к препарату.

Концентрации Цитросепта, использованные в этих исследованиях, которые тормозили рост дрожжеподобных грибков рода кандида, были гораздо ниже (от 2 до 100 раз) концентраций, обычно применяемых на практике.

Результаты указывают, что препарат может применяться при лечении заболеваний, вызванных грибками рода кандида.

Выводы

• Все исследованные образцы дрожжеподобных грибков рода кандида показали значительную чувствительность к Цитросепту.
• Наиболее чувствительными к препарату были образцы вида Candida tropicalis и Candida krusei.
• Наименее чувствительными к Цитросепту были образцы вида Candida parapsilosis и Candida kefyr.
• Учитывая его высокую противогрибковую активность, Цитросепт может найти применение при лечении заболеваний, вызванных дрожжеподобными грибками рода кандида.

Чувствительность к Цитросепту 98 образцов дрожжеподобных грибков рода кандида

Дрожжеобразные	Кол-во	Наименьшая сдерживающая концентрация MIC в mг/мл
грибки	образцов	£12,5	25	50	100	200	>200
Candida albicans	49	5	2	5	6	15	16
Candida glabrata	10		1		4	5
Candida kefyr	2					2
Candida krusei	8	1	2		1	4
Candida parapsilosis	9					5	4
Candida tropicalis	20	4	3	1	2	6	4
Всего	98	10	8	6	13	37	24